Kas notiek, ja pievienojat pārāk daudz restrikcijas enzīma?
Kas notiek, ja pievienojat pārāk daudz restrikcijas enzīma?

Video: Kas notiek, ja pievienojat pārāk daudz restrikcijas enzīma?

Video: Kas notiek, ja pievienojat pārāk daudz restrikcijas enzīma?
Video: Restriction enzymes 2024, Decembris
Anonim

Var rasties nepilnīga gremošana kad par daudz vai arī maz enzīms tiek izmantots. The piesārņotāju klātbūtne uz DNS paraugs var kavēt fermentus , kā rezultātā rodas arī nepilnīga gremošana. Dažas restrikcijas enzīmi pilnai darbībai nepieciešami kofaktori.

Turklāt, kāpēc restrikcijas enzīmi tiek pievienoti pēdējie?

The restrikcijas enzīms parasti ir Pēdējais komponents pievienots uz reakciju, lai nodrošinātu, ka tas nav pakļauts ekstremāliem apstākļiem. Samontētā reakcija jāsamaisa pēc tam enzīms papildinājums. Sajauc visus šķīdumus, kas satur restrikcijas enzīmi maigi, lai izvairītos enzīms inaktivācija.

Turklāt, kā var uzlabot restrikcijas enzīmu gremošanu? Izmantojiet ne vairāk kā ieteikts enzīms daudzums (piemēram, 10 vienības no enzīms uz mikrogramu DNS). Samaziniet daudzumu enzīms reakcijā, ja nepieciešams. Izvairieties no ilgstošas inkubācijas gremošanu reakcija. Izmantojiet ieteicamo reakcijas buferšķīdumu.

Ziniet arī, kāpēc restrikcijas enzīms nevarētu samazināties?

Sadalāmās DNS sagatavošana vajadzētu nesatur piesārņotājus, piemēram, fenolu, hloroformu, spirtu, EDTA, mazgāšanas līdzekļus vai pārmērīgus sāļus, kas visi var traucēt restrikcijas enzīms aktivitāte. Ja ir inhibitors (bieži vien sāls, EDTA vai fenols), kontroles DNS to darīs nav sagriezts pēc sajaukšanas.

Kāpēc fermenta daudzums var izraisīt zvaigžņu aktivitāti?

Zvaigžņu darbība ir ierobežojuma specifikas atvieglošana vai izmaiņas enzīms mediēta DNS šķelšanās, kas var rodas reakcijas apstākļos, kas būtiski atšķiras no tiem, kas ir optimāli enzīms . Zvaigžņu darbība var notiek Mg klātbūtnes dēļ2+, kā ir redzams, piemēram, HindIII.

Ieteicams: