Vai varat secēt PCR produktu?

2024 Autors: Stanley Ellington | [email protected]. Pēdējoreiz modificēts: 2023-12-16 00:20

Tieša Secība no PCR produkti . Tas ir pilnīgi iespējams tieši secība a PCR produkts iepriekš neklonējot fragmentu. Tieša PCR sekvencēšana ir reti veiksmīga, ja vien tu pavadīt kādu laiku, lai to nodrošinātu tu neietilpst viens no daudzajiem slazdiem.

Kas šādā veidā ir PCR sekvencēšana?

Tieša Secība no PCR Produkti. Jums ir jānoņem visi PCR primerus un neinkorporētus nukleotīdus pirms produkta secīgi . Secība izmanto tikai vienu grunti divu izmantoto vietā PCR . Ja nenoņemsiet abus gruntējumus, jūs iegūsit divus sekvences uzliktas viens otram, kas nav salasāmi.

Tāpat, vai es varu izmantot PCR primerus sekvencēšanai? PCR praimeri ir paredzēti PCR pastiprināšana, lai iegūtu amplikonu. Sekvences primeri ir lietots uz secība DNS fragmentu un atklāj tā DNS secība identificēt. 4. Divi PCR praimeri ir nepieciešami a PCR reakcija (parasti); tikai viens sekvencēšanas grunts ir pievienots a sekvencēšana reakcija.

Ņemot to vērā, kā jūs pārbaudāt PCR produktus?

Atklāšana un analīze PCR produkti . The produkts no a PCR jābūt noteikta garuma DNS fragmentam vai fragmentiem. Pastiprināto secību noteikšanai var izmantot daudzas metodes (sk. tabulu). Vienkāršākā un visbiežāk izmantotā tehnika ir elektroforēze PCR produkts uz agarozes gēla ar EtBr (etīdija bromīdu).

Kāpēc pirms sekvencēšanas ir jāattīra PCR produkti?

Attīrīšana DNS no a PCR reakcija ir tipiska nepieciešams, lai pakārtoto izmantošanu un atvieglo fermentu, nukleotīdu, praimeru un bufera komponentu noņemšanu.