Satura rādītājs:

Kā jūs izvēlaties klonus?
Kā jūs izvēlaties klonus?

Video: Kā jūs izvēlaties klonus?

Video: Kā jūs izvēlaties klonus?
Video: ⚡️⚡️⚡️Скандальное интервью Президента Беларуси А.Г.Лукашенко телекомпании CNN ПОЛНАЯ ВЕРСИЯ!! +sub 2024, Novembris
Anonim

Kad izvēloties a klons , pārliecinieties, ka saknes ir spēcīgas, baltas un dedzīgi izvirzītas no augšanas vides. Ja saknes ir brūnas un sarucis vai kā citādi šķiet neaktīvas, novietojiet to atpakaļ un meklējiet labāku.

Turklāt, kā jūs klonējat vienu šūnu?

  1. Saskaitiet šūnas, lai ievietotu ~ 16 000 šūnu pirmajā iedobē (A1) 96 iedobju platei, kas satur 200 µL barotnes.
  2. Izņemiet 100 µL no A1 saturošām šūnām un samaisiet ar B1, 3x pipeti uz augšu un uz leju, lai labi samaisītu, pirms izņemat 100 µL un sajaucat ar C1 utt.

Kā arī izvēlēties zīdītāju šūnu koloniju? Novietojiet plāksni zem mikroskopa, lai izvēlētos nediferencētu veselīgu kolonijas . Izvēlieties kolonijas izmantojot P-20 pipeti, kas iestatīta uz 10 ul. Uzmanīgi izvēlēties a kolonija nesalaužot kolonija vienā šūnas , un pārnes to 96 iedobju plāksnē ar tripsīnu. Pāris reizes ar pipeti veiciet augšup un lejup, lai izkliedētu kolonija.

Attiecīgi, kā jūs izmantojat klona cilindru?

Izmantojot sterilas vidējas knaibles, paņemiet a klonēšanas cilindrs . Viegli piespiediet plakano apakšu cilindrs gludajā silikona smērē un noņemiet ar pēkšņu vertikālu kustību. Ja tas tiek darīts pareizi, tas nodrošinās vienmērīgu smērvielas sadalījumu pa apakšu cilindrs . Iestatiet cilindrs pār koloniju.

Kā jūs izvēlaties kolonijas stabilām šūnu līnijām?

Stabilu šūnu līniju ģenerēšanas protokolam ir jāveic vairākas darbības, kā parādīts tālāk:

  1. Izveidojiet nogalināšanas līkni, lai noteiktu optimālo atlases antibiotikas koncentrāciju.
  2. Transfektējiet šūnas ar vēlamo plazmīdas konstrukciju(-ām)
  3. Atlasiet un paplašiniet stabilas poliklonālās kolonijas.
  4. Identificējiet atsevišķus klonus ar ierobežotu atšķaidīšanu un paplašināšanu.

Ieteicams: