Kāds ir ddNTP izmantošanas mērķis?
Kāds ir ddNTP izmantošanas mērķis?

Video: Kāds ir ddNTP izmantošanas mērķis?

Video: Kāds ir ddNTP izmantošanas mērķis?
Video: Sanger sequencing 2024, Novembris
Anonim

DdNTP attiecas uz Dideoksinukleotīdi trifosfāti, kas tiek izmantoti Sanger dideoxy metodē, lai iegūtu dažāda garuma DNS virknes DNS sekvencēšanai. Tā rezultātā DNS polimerizācijas (vai DNS pagarināšanas) process tiek pārtraukts, jo šim procesam ir nepieciešama 3'-OH grupa, lai turpinātu.

Tātad, kāpēc ddNTP tiek izmantoti sekvencēšanā?

Dideoksinukleotīdi ir DNS polimerāzes inhibitori, kas pagarina ķēdi, lietots Sangera metodē DNS sekvencēšana . Dideoksiribonukleotīdiem nav 3' hidroksilgrupas, tāpēc ķēde vairs nepagarinās, tiklīdz šis dideoksinukleotīds atrodas ķēdē. Tas var novest pie DNS pārtraukšanas secība.

Līdzīgi, vai ddNTP pievienojas dNTP? Viens vai vairāki no dNTP ir radioaktīvi marķēti, lai palīdzētu vizualizēt replikācijas produktus. Visbeidzot, katra caurule saņem vienu no četriem īpašiem nukleotīdiem, ko sauc dideoksinukleotīdi ( ddNTP ). Tomēr pēc iekļaušanas DNS polimerāze nevar tālāk pagarināt ķēdi, jo tai ir nepieciešams 3'-OH pievienot uz nākamo nukleotīdu.

Līdzīgi var jautāt, kā ddNTP aptur sekvencēšanas reakciju?

Ja ir nelielos daudzumos sekvences reakcijas didezoksiribonukleozīdu trifosfāti ( ddNTP ) pārtraukt sekvences reakcija dažādās pozīcijās augošajos DNS pavedienos. ddNTP aptur sekvencēšanas reakciju jo tie: izraisa DNS polimerāzes nokrišanu no šablona virknes. c.

Kādu tehniku varētu izmantot, izmantojot dideoksinukleotīdus?

Sangera sekvencēšana ir a metode DNS sekvencēšana, kuras pamatā ir ķēdes beigu selektīva iekļaušana dideoksinukleotīdi DNS polimerāze in vitro DNS replikācijas laikā. To 1977. gadā izstrādāja Frederiks Sangers un kolēģi, un tas bija visplašāk lietots sekvencēšana metode apmēram 40 gadus.

Ieteicams: